相對(duì)定量 (mRNA表達(dá)量分析)：基因表達(dá)的研究一般采用相對(duì)定量的方法。相對(duì)定量法必須對(duì)樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對(duì)于內(nèi)參基因的目的基因的相對(duì)量。通過對(duì)樣品間的目的基因的相對(duì)量進(jìn)行比較，可以對(duì)不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。內(nèi)參基因通常選用表達(dá)量相對(duì)恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時(shí)對(duì)內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對(duì)樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
服務(wù)價(jià)格
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服務(wù)編號(hào) |
服務(wù)內(nèi)容 |
價(jià)格 |
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CWS022 |
合成探針 |
￥2000/條 |
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CWS027 |
樣品檢測(cè) |
￥298/樣品?基因 |
服務(wù)內(nèi)容
以熒光定量PCR方法對(duì)樣本基因表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
·先進(jìn)的儀器，優(yōu)質(zhì)的試劑，專業(yè)的團(tuán)隊(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
·免費(fèi)設(shè)計(jì)優(yōu)化引物，使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上，使相對(duì)定量結(jié)果更可靠。
樣品要求
客戶需提供組織、細(xì)胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：
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材料種類 |
樣品要求 |
起始量 |
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血液 |
新鮮血液及抗凝劑處理的全血 |
1ml |
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培養(yǎng)細(xì)胞 |
離心收集的細(xì)胞 |
1x107 |
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動(dòng)物組織 |
一般材料 |
100mg |
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植物 |
一般材料 |
100mg |
| RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好 | >1ug |
| DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之間，完整性好 | >1ug |
| cDNA | 內(nèi)參基因檢測(cè)成功 | >20ul |
終產(chǎn)品
·目的基因剩余引物 (上游引物和下游引物，合成量≥2OD)；
·目的基因引物序列；
·相對(duì)定量實(shí)驗(yàn)報(bào)告；
·剩余探針。
服務(wù)說明
·客戶提供基因序列。
·以上報(bào)價(jià)是以提取的核酸（DNA或cDNA）為起始材料設(shè)定的，如果需要進(jìn)行核酸純化，費(fèi)用另計(jì)。
·如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動(dòng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。
·公司還提供絕對(duì)定量服務(wù)，客戶需提供標(biāo)準(zhǔn)品，若需制備標(biāo)準(zhǔn)品，費(fèi)用另計(jì)。
